DU145，人前列腺癌細胞常備細胞說明

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細胞樣本收集標準-收集貼壁細胞步驟：

1.移除細胞培養基。

2.沿著培養皿壁緩慢加入PBS（無鈣鎂離子），勿將細胞沖離培養皿，溫和晃動培養皿，清洗細胞表面。

3.移除PBS。

4.加入細胞消化液（如胰蛋白酶等），使消化液能覆蓋所有細胞。在37℃孵育2-3min，溫和晃動培養皿知道細胞開始剝離培養皿。

5.加入培養基終止消化，溫和重懸細胞

6.200X g，離心10min，收集細胞

7.移除上清液，用PBS清洗細胞沉淀兩次

8.后200X g，離心10min，收集細胞沉淀

收集懸浮細胞步驟：

1.將細胞懸液轉移至離心管中

2. 200X g，離心10min，收集細胞

3. 移除上清液，用PBS清洗細胞沉淀兩次

4. 后200X g，離心10min，收集細胞沉淀

送樣要求：

1. 基因組DNA: OD 260/280 在1.8～2.0之間, 濃度≥50ng/μl,體積≥20μl；

2. 新鮮細胞：（1）細胞數≥10⁶；（2）貼壁細胞經胰蛋白酶消化后，離心收集細胞沉淀；（3）懸浮細胞直接離心收集細胞沉淀；（4）PBS清洗細胞沉淀，盡可能去除培養基與胰酶；

3. 凍存細胞：細胞數≥10^6，凍存細胞從液氮罐中，37℃水浴復蘇，融化后離心收集細胞沉淀，盡可能去除凍存液，否則會影響DNA抽提質量；

4. 樣本寄送：應在送樣包裹中放置足量的冰袋或干冰，以減少在運輸過程中因溫度變化導致DNA降解的可能；如無法使用冷凍寄送，請將細胞沉淀用真空抽干（無殘留任何液體、不可加熱）；

5. 為了保證DNA抽提質量，確保細胞在消化或凍存前，細胞狀態良好，處于生長對數期；

不建議以細胞懸液或細胞培養瓶形式寄送樣本

客戶須知：

1. 細胞系并非人體細胞，細胞來源的問題可能導致等位基因的不均一性，從而使STR位點具有潛在不均一性；

2. 八個位點+性別鑒定以外的位點為翼和贈送的非標準位點，翼和保證結果的真實性，其復雜性會高于標準性位點.

備注：

1、用戶在寄送樣品時，請將此表打印和樣品一并放入包裝中，包裝用泡沫箱和冰袋，建議順豐快遞；

2、人源細胞，公司會同DSMZ數據庫進行比較；數據庫無該類型細胞，則需要用戶自行上網比較

寄送注意事項：細胞數量 10的6次方 左右 ，然后離心收集沉淀（如果是貼壁 先消化一下，如果是凍存的  先37度水浴復蘇10分鐘），收集沉淀離心后倒掉上清（用PBS清洗1遍，避免PCR抑制劑殘留影響結果），放入泡沫箱  +冰袋+送樣單填好打印，用順豐速運，寄給我們。