HT-29，人結(jié)腸癌細(xì)胞常備細(xì)胞說(shuō)明

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細(xì)胞樣本收集標(biāo)準(zhǔn)-收集貼壁細(xì)胞步驟：

1.移除細(xì)胞培養(yǎng)基。

2.沿著培養(yǎng)皿壁緩慢加入PBS（無(wú)鈣鎂離子），勿將細(xì)胞沖離培養(yǎng)皿，溫和晃動(dòng)培養(yǎng)皿，清洗細(xì)胞表面。

3.移除PBS。

4.加入細(xì)胞消化液（如胰蛋白酶等），使消化液能覆蓋所有細(xì)胞。在37℃孵育2-3min，溫和晃動(dòng)培養(yǎng)皿知道細(xì)胞開(kāi)始剝離培養(yǎng)皿。

5.加入培養(yǎng)基終止消化，溫和重懸細(xì)胞

6.200X g，離心10min，收集細(xì)胞

7.移除上清液，用PBS清洗細(xì)胞沉淀兩次

8.后200X g，離心10min，收集細(xì)胞沉淀

收集懸浮細(xì)胞步驟：

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中

2. 200X g，離心10min，收集細(xì)胞

3. 移除上清液，用PBS清洗細(xì)胞沉淀兩次

4. 后200X g，離心10min，收集細(xì)胞沉淀

送樣要求：

1. 基因組DNA: OD 260/280 在1.8～2.0之間, 濃度≥50ng/μl,體積≥20μl；

2. 新鮮細(xì)胞：（1）細(xì)胞數(shù)≥10⁶；（2）貼壁細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后，離心收集細(xì)胞沉淀；（3）懸浮細(xì)胞直接離心收集細(xì)胞沉淀；（4）PBS清洗細(xì)胞沉淀，盡可能去除培養(yǎng)基與胰酶；

3. 凍存細(xì)胞：細(xì)胞數(shù)≥10^6，凍存細(xì)胞從液氮罐中，37℃水浴復(fù)蘇，融化后離心收集細(xì)胞沉淀，盡可能去除凍存液，否則會(huì)影響DNA抽提質(zhì)量；

4. 樣本寄送：應(yīng)在送樣包裹中放置足量的冰袋或干冰，以減少在運(yùn)輸過(guò)程中因溫度變化導(dǎo)致DNA降解的可能；如無(wú)法使用冷凍寄送，請(qǐng)將細(xì)胞沉淀用真空抽干（無(wú)殘留任何液體、不可加熱）；

5. 為了保證DNA抽提質(zhì)量，確保細(xì)胞在消化或凍存前，細(xì)胞狀態(tài)良好，處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期；

不建議以細(xì)胞懸液或細(xì)胞培養(yǎng)瓶形式寄送樣本

客戶須知：

1. 細(xì)胞系并非人體細(xì)胞，細(xì)胞來(lái)源的問(wèn)題可能導(dǎo)致等位基因的不均一性，從而使STR位點(diǎn)具有潛在不均一性；

2. 八個(gè)位點(diǎn)+性別鑒定以外的位點(diǎn)為翼和贈(zèng)送的非標(biāo)準(zhǔn)位點(diǎn)，翼和保證結(jié)果的真實(shí)性，其復(fù)雜性會(huì)高于標(biāo)準(zhǔn)性位點(diǎn).

備注：

1、用戶在寄送樣品時(shí)，請(qǐng)將此表打印和樣品一并放入包裝中，包裝用泡沫箱和冰袋，建議順豐快遞；

2、人源細(xì)胞，公司會(huì)同DSMZ數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較；數(shù)據(jù)庫(kù)無(wú)該類(lèi)型細(xì)胞，則需要用戶自行上網(wǎng)比較

寄送注意事項(xiàng)：細(xì)胞數(shù)量 10的6次方 左右 ，然后離心收集沉淀（如果是貼壁 先消化一下，如果是凍存的  先37度水浴復(fù)蘇10分鐘），收集沉淀離心后倒掉上清（用PBS清洗1遍，避免PCR抑制劑殘留影響結(jié)果），放入泡沫箱  +冰袋+送樣單填好打印，用順豐速運(yùn)，寄給我們。