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技術文章 / article
胎牛血清的制備流程非常嚴格，放心使用
2019-08-30 瀏覽次數：2556
胎牛血清的制備流程非常嚴格，放心使用
1、血清來源：可從世界各國收集胎牛血清，但是必須符合他的質量標準。地方當局還不清楚本地是否有牛海綿狀病毒流行的血清不收集，有說明血清質量的證明資料：包括收集過程的全部資料、檢驗結果和交付情況。
2、血清的收集：胎牛血清是心臟穿刺取血，新生牛(10～14天)和小牛(10個月內)血清靜脈取血。血清采集條件必須符合工業生產的標準：低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存。符合要求的血清56℃水浴30分鐘滅活。
3、血清的制備：
a. 超低IgG胎牛血清：通過親和層析工藝去除胎牛血清中的γ球蛋白，使FBS γ球蛋白含量減到zui低，一般IgG≤5ug/ml，生物學活性不變。
b. 血清透析：用12000～14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/過氧化酶方法測定)。
c. γ-射線照射：已經證明γ-射線照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。照射劑量為30～45KG。而且這個劑量的γ-射線照射不會改變血清的理化性質和對細胞培養的影響。
4、除菌過濾:經過上述處理的粗制血清再經過一系列除菌濾膜過濾包括0.2微米(micron)和0.1微米濾膜。FBS要通過三層0.1微米濾膜，其他血清可通過0.2微米濾膜。
成品血清質量檢定
1)化學檢定：滲透壓pH
蛋白含量――電泳法
白蛋白 球蛋白 血紅蛋白
隨著牛年齡增加血清中總蛋白含量相應增加，總的血清蛋白含量可以確定產品規格和年齡。
2) 微生物學檢查：細菌、真菌符合USP標準。
支原體：在支原體專業培養基上培養了3～4周，培養溫度36℃±2℃
分別在需氧和厭氧條件下進行，有的還需要在支原體瓊脂培養皿上傳4次，Hoechst熒光素DNA染色檢查那些培養法
無法檢出的支原體如豬鼻支原體等。
3)內毒素檢測
用鱟試劑檢查。
4)細菌噬菌體檢查
主要檢查E.Coli(C300 or K-12)噬菌體。
5)激素含量測定
每批FBS對某些激素含量都要進行測定，包括：雌二醇、胰島素、孕硐、睪wan素、甲狀腺素等。
6)血紅蛋白檢測
血紅蛋白與氧合血紅蛋白的比≥70%，血紅蛋白含量≤mg15/dl。
7)細胞生長效果測定
細胞克隆效果測定，細胞選擇：Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653。
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