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技術文章 / article
胎牛血清（FBS）知多少
2021-10-11 瀏覽次數：2484
胎牛血清
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品質高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。
胎牛血清要求：
1、性狀、外觀：淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。
2、蛋白質含量：3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量：≤ 0.02%( w/v)
4、無菌檢驗：陰性
5、支原體檢驗：陰性
6、細菌內毒素：≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒：陰性
8、大腸桿菌噬菌體：陰性
9、支持細胞增殖：(Sp2/0-Ag14) 生長曲線 (接種濃度)最大增殖濃度 ≥2.5×106個/ml，細胞倍增時間：≤15h，克隆率：≥85%
胎牛血清功能
牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必需的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。
2. 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。
3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。
胎牛血清的評估標準
胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養基也逐漸走紅，但許多細胞系未必適用，并且存在費用較高和生長較慢等缺點。那么，研究人員在評估FBS的質量時，需要考慮哪些標準呢？
對于細胞培養而言，血清的重要性不言而喻。它含有蛋白、生長因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他組分，可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養基也逐漸走紅，但許多細胞系未必適用，并且存在費用較高和生長較慢等缺點。
目前，市場上存在著不同等級的FBS。由于FBS關乎細胞活力和實驗重復性等重要的參數，故在質量方面是絕對不能含糊的。若質量不穩定，則有可能導致實驗失敗。那么，研究人員在評估FBS的質量時，需要考慮哪些標準呢？
1.可追溯性
對于科學家而言，最大的風險也許是FBS的純度大打折扣，這可能導致細胞培養實驗的效果不佳。許多FBS的賣家與多個產地簽訂短期供應協議來采集原材料，以便降低成本。他們將這些產品混合，稀釋不同來源的影響。然而，最終結果就是質量不穩定，產品供應和價格出現波動。
針對這一問題，國際血清行業協會(ISIA)實施了供應鏈可追溯性的行業標準，這對確保FBS各個批次的質量、安全性和重復性起了關鍵作用。一些公司提供化學分析，說明原產國的統計概率。也許好的方法是追溯到動物，以確保產品的來源。
FBS的供應商是否在整個供應鏈中都保留原產地的可追溯記錄？他們是否持有文件，支持各個階段的處理、運輸和商業交易？他們能否展示*來源的可追溯性，以確保重復性和低病毒風險？在考慮購買FBS時，這都是你需要考慮的問題。
地域性風險評估(GBR)是定性評估一個國家或地區的動物感染疾病(如瘋牛病)的可能性。這種方法依賴世界動物衛生組織(OIE)的監控系統，將每個國家或地區的瘋牛病風險進行分類。OIE評估各個國家的獸醫服務、疾病診斷能力、覺察癥狀能力及其他因素，以避免瘋牛病的傳播。
新西蘭和澳大利亞都獲得了GBR 1級，這意味著它們目前是沒有瘋牛病和口蹄疫的。這兩個國家都是出了名的病毒風險低的國家。由于環境受到保護，以及嚴格的農業法規和入境要求，再加上它們都是島國，動物們不太可能受到其他地區疾病的影響。這對于那些敏感的細胞系和實驗而言特別有用。對科學家來說，好處是花在重復實驗或檢驗新批次上的時間將大大減少。
2.質量
對血清而言，產品質量尤為關鍵。由美國食品和藥品管理局(FDA)執行的cGMP規范建立了完整體系，以確保制造過程和工廠的正確設計、監控和控制。在購買血清時，你最好選擇遵從cGMP規范的供應商，以便降低產品混合和標簽錯誤的風險。
確保各批次一致性還涉及其他因素，包括牛群環境、食物來源以及質量控制檢測程序。正確采集血清，才能保證它天然的促進生長特性，并實現FBS產品的出色表現。當然，這些資料收集起來可不容易，那么你可以依靠國際機構(如FDA、USDA、AQIS等行業協會)的認證，來尋找理想的供應商。
3.價格
有時，FBS的價格會大幅波動，這取決于許多因素。作為肉類行業的副產品，FBS的生產在本質上會受到天氣和食物供應、經濟條件和牛群規模等各種因素的影響。如果病毒不定期再來搗亂一下，那么牛的數量必然下降，FBS的供應也勢必減少。此外，由于干旱導致奶牛飼養費用較高，農民可能會將牛賣掉或屠宰，導致牛群數量下降。
值得一提的是，世界對FBS的需求還在不斷增加。每年，全球大約生產600,000 L的FBS，其中cGMP等級的不足200,000 L，而后者正是大多數工業生產公司的要求。隨著大型制藥公司的需求上升，FBS的價格也在持續上漲。此時，找到一家可以提供同批次FBS的供應商是十分必要的，這既確保了產品供應，也在一定程度上避免價格波動。
4.檢測
定期的產品檢測當然也不能少。大家應注意產品的供應商是否定期進行生化、激素、病毒和功能方面的檢測，包括檢測細菌、病毒及其他微生物是否存在，以確保產品經過全面鑒定。質量控制檢測也應當開展，以確保血清產品始終符合規定并合乎規格。
總的來說，FBS及其他血清有可能大大影響細胞培養工作的質量和重復性。因此，在購買過程中，我們有必要對FBS的身世、質量以及質檢過程做到心中有數，而不僅僅被價格所左右，這樣才能改善實驗結果，節省寶貴時間
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